產品中心
PRODUCT CENTER
用于超靈敏熒光分析的醛基銪熒光磁珠
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Cat. No. |
Product Name |
Unit Size |
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GA101 |
2.5 μm BcMag? Aldehyde-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
15 mg |
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GA102 |
2.5 μm BcMag? Aldehyde-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
30 mg |
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GA103 |
5 μm BcMag? Aldehyde-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
15 mg |
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GA104 |
5 μm BcMag? Aldehyde-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
30 mg |
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Fluorescence dye properties
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Fluorophore |
Fluorescence color |
Excitation (nm) |
Emission (nm) |
Fluorescence lifetime (?) (μsec) |
Stokes shifts (nm) |
Selection of Emission Filter |
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Europium ion (Eu3+) |
Red |
340 |
615 |
730 |
275 |
620/40 |
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產品屬性 |
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磁珠大小 |
2.5μm 直徑; 或5μm直徑 |
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磁珠數量 |
~1.47 x 108 beads/mg (2.5μm) ~ 5 x 107 beads /mg (5μm) |
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穩定性 |
短期保存 (<1 hour): pH 3-11; 長期保存: pH 4-10 溫度: 4°C -140°C; 大多數有機溶劑 |
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磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
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磁力類型 |
超順磁性 |
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濃度 |
30 mg/ml (1 mM ETDA, pH 7.0) |
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功能團密度 |
2.5μm 磁珠 |
~240 μmole / g |
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5μm 磁珠 |
~200 μmole / g |
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儲存 |
儲存在 -20°C. |
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BcMag?醛基銪熒光磁珠（圖1）是具有高密度醛基官能團的時間分辨熒光（TRF）磁珠。磁珠表面的醛基可以與蛋白質的N-末端或賴氨酸殘基上的伯胺基自發反應，形成中間的席夫堿絡合物。還原胺產生的固定化反應始于醛基和胺基之間產生初始產物聚希夫堿復合物，然后通過添加氰基硼氫化鈉（NaCNBH3）將其還原為仲胺，這樣在磁珠和配體之間就可以產生穩定的胺鍵。在含有20-30%DMSO或DMF的水性或有機溶劑中，生理堿性環境（pH 7.2至9）下，偶聯反應僅需一步2至6小時的反應過程。與抗體和正常蛋白質的偶聯效率通常大于85%，而且每毫克磁珠可以結合15至20μg蛋白。
這種磁珠通過結合活性醛基官能團、時間分辨熒光染料和磁性特性，提供了一種高靈敏度的檢測方法。它們由納米級超順磁性氧化鐵和銪金屬核心組成，完全被高純度二氧化硅外殼包裹，確保鐵氧化物和銪金屬不會出現浸出問題。這種親水磁珠具有極低的非特異性吸附率，在各種緩沖液中具有良好的分散性和易于處理的特點。
盡管傳統的熒光顯色技術在過去幾十年中得到了廣泛應用，但它們在適用性和效率方面仍存在一些局限性：1.激發帶較窄，背景信號強。2.斯托克斯位移較小，容易造成自熄現象。3.熒光對環境因素敏感，如金屬離子濃度、pH值、溫度和溶劑極性。4.熒光強度不足，不能檢測單個生物分子。5.熒光間歇性（閃爍）影響分子檢測的某些數據處理過程，造成誤差。6.由于疏水性，容易聚集。
BcMag? TR-FRET（時間分辨熒光共振能量轉移）測定方法
BcMag? TR-FRET測定方法與傳統的FRET（F?rster共振能量轉移）測定方法不同，它利用時間分辨熒光磁珠（BcMag? TR-Magnetic Beads）作為熒光供體團。供體和受體可以是兩個蛋白質、兩個DNA鏈、抗原、抗體或配體或其它受體。在一定的時間延遲后（通常為50至100秒），當供體和受體分子靠近并以時間分辨方式進行監測時，通過熒光共振能量轉移產生信號。在BcMag? TR-FRET測定方法中，微量的分析物可以通過時間分辨磁珠輕松地從樣品中富集，從而提高靈敏度。該測定方法消除了由樣品和塑料微孔板引起的所有熒光背景影響，以及直接激發受體所產生的背景影響。因此，BcMag? TR-FRET測定方法的信噪比非常高，背景值非常低。此外，該測定方法不需要清洗步驟。BcMag? TR-FRET測定方法在高通量篩選的生物分析中具有顯著的優勢，如測定靈活性、可靠性、提高測定靈敏度、更高的通量和更少的假陽性/假陰性結果。
由于其獨特的特性，銪熒光團是一種高效的時間分辨熒光標記。它在340nm處激發，發出615nm的紅色熒光，具有長熒光壽命（730微秒）和較大的斯托克斯位移（275nm）。利用這些特性，時間分辨熒光檢測可以顯著降低樣品的熒光背景，并提高信噪比，使其比傳統熒光染料具有更高一個數量級的檢測能力。BcMag? 醛基銪熒光磁珠是TR-FRET測定中優秀的供體材料。
TR-FRET磁性珠測定方法的工作流程（圖2）
1.將與抗體結合的供體磁珠與細胞裂解液混合，并在連續旋轉下孵育足夠的時間。在混合過程中，磁珠保持懸浮在樣品溶液中，使目標分析物能夠與供體磁珠結合。2. 孵育后，使用磁力架將磁珠從樣品中收集和分離。3. 添加與目標分析物結合的受體，并在連續旋轉下孵育足夠的時間。4. 多種微孔板讀數儀進行TR-FRET測定。
優勢和特點：
1. 本款磁珠具有在一種磁珠上，可以同時表現出雙重功能的特點：分離/預濃縮和檢測分析物，能夠在同一磁珠上快速、簡便、穩定和高通量地從復雜生物樣品中分析痕量分析物。
2. 超高的靈敏度。檢測限值低至10 pg/mL，而典型熒光測定的檢測限值為100 pg/mL。
3. 極高的光穩定性和耐光漂白性。所有的鑭系螯合物或香豆素分子以及氧化鐵完全封閉在磁珠的內部，而不僅僅是在磁珠表面上。這種保護環境可以防止氧化鐵和染料溶解到水介質中，使磁珠對溶劑、溫度、pH等外部條件的敏感性降低。
4. 高熒光強度。由于單個磁珠含有高濃度的鑭系螯合物，并且鑭系螯合物本身具有40%到90%的高量子產率，因此磁珠具有超強的熒光強度，可顯著提高分析靈敏度，而無需信號放大。這種高亮度的磁珠也是時間分辨FRET分析的完美供體。
5. 鑭系螯合物或香豆素具有較大的斯托克斯位移（>250nm）、較窄的發射帶（-10nm帶寬）和較長的熒光壽命（μs），這大大降低了背景影響并提高了信號和干擾信號的比例。
6. 大多數生物檢測過程的ELISA測定可以轉化為HTRF測定。
7. 測定過程中無需清洗步驟。
8. 磁珠具有親水性二氧化硅表面，通過具有不同長度連接劑的不同功能基團進行接合，可高效地結合多種配體，如多肽、蛋白質、抗體、小分子、碳水化合物、寡核苷酸、DNA/RNA等。
9. 由于磁珠的磁性特性，熒光磁珠非常適合于高通量自動化。
